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色谱柱使用过程中的护柱方法及柱压升高原因

发表时间:2018-08-23  |  点击率:2257

一、色谱柱使用过程中的护柱方法

1、好用预柱。(但要注意,若有时出峰异常,要先看看是不是它有问题了)

2、每次做完分析,都要进行冲洗,

①分析用流动相中若无酸、碱、盐类物质,建议用90%甲醇冲洗30~60min;

②若分析用流动相中含以上物质,要先用10%甲醇(或用与分析用流动相同比例,把含酸、碱、盐溶液换成水)冲洗1小时左右,再C梯度走到90%甲醇冲洗30~60min(若用多元泵)。有必要时再循环几次,可以适当缩短时间。

③若长时间不用该色谱柱,要冲洗好后,用纯甲醇或乙腈封存。

3、若流动相中用到离子对试剂,更应该好好冲洗,且该色谱柱好作为,不能再做其它物质分析用。因色谱柱填料性质已与原来所不同,在该柱上所摸索的色谱条件,可能在其它同类柱子上得不到重现。

4、尽量避免反冲,除非该色谱柱厂家明确说明允许。

5、普通气相毛细管色谱柱尽量避免在40℃以上的温度下分析。

6、定期测柱效,有下降,可以用10%异丙醇甲醇冲洗色谱柱。若柱效还没有改善,可以再生,甲醇-二氯甲烷-甲醇。

二、色谱柱在使用过程柱压升高的原因
 
    柱压与硅胶基质的形态(如无定形或球形硅胶)、颗粒大小、填料合成条件、装柱条件、所用流动相和分析时的温度有关。不同厂家的色谱柱柱压会有所差别,相同流动相和温度的条件下,不同厂家的新色谱柱有的柱压可能相差4、5 个MPa,特别是低端和色谱柱之间,这一区别比较明显。这是由色谱柱厂家所选用的硅胶基质及其生产条件决定的,这种差异的存在是正常的。同时需要说明的一点是,柱压与柱效有一定的关系,通常柱效高的色谱柱柱压相对而言会高一点,但柱压高的色谱柱并不一定就具有高柱效。

    在色谱柱的使用过程中柱压通常会出现两种升高的形式:种是,随着使用时间的延长色谱柱柱压慢慢上升,这是正常的;第二种是,使用过程中(流动相和温度没有改变的条件下)色谱柱压力突然升高很多。这种压力突然升高的现象,通常是由工作人员操作不当引起的,原因:
1)样品太脏,使用前没有过滤,导致柱筛板堵塞。
2)样品含有的杂质在流动相中的溶解性不是很好,与流动相混合后析出,导致柱塞板堵塞。